1,酵母单杂交适合做什么
可以用来做转录因子方面的测定
单杂交研究细胞内蛋白质与dna的特定序列间的相互作用双杂交,三杂交研究细胞内蛋白质与蛋白质之间的相互作用
2,酵母单杂交的介绍
酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法,主要包括四个流程即:一、筛选含有报告基因的酵母单细胞株;二、构建表达文库;三、重组质粒转化至酵母细胞;四、阳性克隆菌株的筛选。
3,酵母单杂交的缺点
由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报告基因的转录,因此往往产生假阳性结果。如果酵母表达的AD融合蛋白对细胞有毒性,或融合蛋白在宿主细胞内不能稳定地表达,或融合蛋白发生错误折叠,或者不能定位于酵母细胞核内,以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点,则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力,从而产生假阴性结果。
你好!支持一下感觉挺不错的仅代表个人观点,不喜勿喷,谢谢。
4,酵母单杂交与细菌单杂交
细菌杂交比较好。
酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的,研究活细胞内蛋白质相互作用,对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到,它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明,酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作,也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此,它在许多的研究领域中有着广泛的应用。基因表达由转录激活剂来激活,转录激活剂通常由dna结合结构域和激活结构域组成,这两部分有不同的基因编码。可将人蛋白基因与酵母激活因子dna结合结构域基因相连,转化酵母后可产生由人蛋白和酵母转录激活剂部分结构组成的融合蛋白;若将多种待测人蛋白基因与编码转录激活剂激活结构域的基因相连,转化酵母则可产生多种融合蛋白。酵母双杂交技术即将上述两种克隆混合同时转染酵母,产生的人蛋白质之间如可相互作用,则可使转录激活剂dna结合结构域和激活结构与相互靠近,激活rna多聚酶,表达某种报告基因(易于检测)。因此可以通过报告基因的检测来推断研究蛋白质之间的相互作用。